ELISAで使う酵素
A. 酵素の条件
イムノアッセイに用いる酵素は，
・測定感度の点から基質転換効率が良いこと，すなわち短時間に多くの基質を反応させられること．
・酵素反応生成物を容易に精度良く，しかも安価に測定できること．そのためには，呈色，蛍光，化学発光等が可能な反応系であること．
・抗原抗体反応を阻害しないこと.
・作製したキットの保存性の点から，酵素活性が長期間安定していること．
などの点から選ばれるが，現在多く使用されているのは，ペルオキシダーゼ，β－ガラクトシダーゼ，アルカリフォスファターゼなどが市販キットに使用されている．
B. 酵素免疫測定法で使用されている主な酵素とその特性
| ペルオキシダーゼ（Hydrogen peroxidase，Horseradish peroxidase，HRP） | |
| 反応 起源 分子量，至適pH 基質特異性 阻害剤と活性化剤 |
色原性基質＋H2O2 ⇔酸化型色素＋２H2O 西洋わさび（Horseradish） 40,000， pH 6.5 色原性基質（水素供与体）については特異性はない．過酸化物としてはH2O2, CH3OOH, C2H5OOHのみ 阻害剤：CN–，S2-，F–，N3–（保存料として用いられるNaN3に注意！） 乾燥，冷蔵状態で数年間，水溶液で冷蔵1年間安定 |
| β－ガラクトシダーゼ（β-D-Galactosidase） | |
| 反応 起源 分子量，至適pH 基質特異性
阻害剤と活性化剤 |
β-ガラクトシド＋H2O ⇔D-ガラクトース＋アルコール 大腸菌，肺炎双球菌 135,000または320,000， pH 7.5 様々なβ-ガラクトシド，したがって色原性アルコールのガラクトシド， 例えばo-nitrophenyl-β-D-galactosideや4-methyl-umberiphelone-β-D-galactoside 活性化剤：一価陽イオン，5%アルコール 阻害剤特になし ４－６ヶ月（４℃）安定 |
| アルカリフォスファターゼ（Alkaline phosphatase） | |
| 反応 起源 分子量と至適pH 基質特異性 阻害剤と活性化剤 |
オルト燐酸モノエステル⇔オルト燐酸＋アルコール 大腸菌，肝臓（子牛） 80,000（大腸菌），190,000（肝臓），pH8.0～10.0 様々なアルコール類（1，２級アルコール，糖，環状，フェノール）の燐酸モノエステル 阻害剤：燐酸塩，亜鉛イオン，青酸イオン，蓚酸，チオール 25℃以下で安定 |
| グルコースオキシダーゼ（Glucose oxidase） | |
| 反応 起源 分子量と至適pH 基質特異性 阻害剤と活性化剤 |
β-D-グルコース＋O2⇔D-グルコースδ-ラクトン＋H2O2 Aspergillus niger, Penicillium notatum, P. amagasakiense 160,000(A. niger), 52,000(P. notatum), 154,000(P. am), pH 5.5 グルコースのβ-アノマー（不斉炭素の置換基とカルボニル水酸基がシスのもの） 阻害剤：Ag, Hg, Cuイオン，p-Chloromercurybenzoate, フェニル酢酸水銀 ４℃で6～12ヶ月安定 |
| グルコース-6-燐酸脱水素酵素（D-glucose-6-phosphate dehydrogenase） | |
| 反応
起源 基質特異性 安定性 |
D-グルコース-6-燐酸NADP（NAD）⇔D-グルコノ-δ-ラクトン-6-燐酸＋NADPH（NADH） 酵母，Leuconostoc mesenteroides 104,000～128,000（酵母），104,000（L. m），pH＞9.0（NADP） pH 7.8（NAD） グルコース-6-燐酸に対してガラクトース-6-燐酸は弱い 酵母浦井の酵素はNADPのみ，L.ｍ由来のものはNADにも作用． 阻害剤：高濃度Mg，及び２価金属イオン 活性化：5～10ｍM Mgイオン 乾燥状態で4℃，3ヶ月安定 3.2M硫安懸濁液はpH 6，４℃で数ヶ月安定 |